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MethylEasy™ DNA亞硫酸氫鹽修飾技術(shù)

 發(fā)布時間:2018/6/28 點擊量:605

Genetic Signatures成立于2001年,由Geoffrey Grigg博士(原澳大利亞聯(lián)邦科學(xué)與工業(yè)研究組織(CSIRO)分子生物學(xué)部主任)創(chuàng)立。甲基化分析中使用廣泛的方法是亞硫酸氫鹽法,由Grigg博士在英國劍橋設(shè)想,并被減少到CSIRO實驗室的實踐中[1]。初的方法隨后得到改進,這些改進導(dǎo)致了遺傳簽名MethylEasy™DNA亞硫酸氫鈉修飾產(chǎn)品系列的開發(fā)和發(fā)布。

由于改進的轉(zhuǎn)化方法和用于胞嘧啶甲基化檢測的應(yīng)用,發(fā)現(xiàn)了一個有趣的發(fā)現(xiàn):通過亞硫酸氫鈉處理微生物DNA能夠?qū)⑺姆N核酸堿基還原成僅三個堿基,通過將胞嘧啶轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶。該技術(shù)被稱為3base ™,是我們的EasyScreen ™病原體檢測試劑盒的基石。

此后,遺傳標志開發(fā)并商業(yè)化了一套基于EasyScreen ™實時PCR的產(chǎn)品,用于常規(guī)檢測傳染病。EasyScreen ™產(chǎn)品為醫(yī)院和病理實驗室提供了分子工具,可在快速高通量的環(huán)境中篩查各種傳染性病原體。

 

MethylEasy™ DNA亞硫酸氫鹽修飾技術(shù)

DNA亞硫酸氫鹽修飾方法

圖1 DNA亞硫酸氫鹽修飾方法在20世紀90年代初之前,很少有技術(shù)能夠評估個體CpG位點水平的基因組DNA中的甲基化模式,并且大多數(shù)這些技術(shù)需要相對大量的起始DNA(高達10μg)。這一難題被GW Grigg博士構(gòu)想的DNA亞硫酸氫鹽修飾方法的出現(xiàn)所克服,并由D Millar博士(現(xiàn)為遺傳簽名有限公司科學(xué)家)與M Frommer博士及其同事[1]共同實踐。

用于測定DNA分子中胞嘧啶殘基的甲基化狀態(tài)的亞硫酸氫鹽方法取決于亞硫酸氫鹽與單鏈DNA中的胞嘧啶的反應(yīng)。胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而5-甲基胞嘧啶(5-mC)不反應(yīng)(見圖1和參考文獻2)[2]??梢酝ㄟ^使用聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)來擴增經(jīng)修飾的DNA鏈,并且可以直接測序,或克隆并測序以從單個DNA分子產(chǎn)生甲基化數(shù)據(jù)。

遺傳簽名有限公司發(fā)明了一種新的DNA亞硫酸氫鹽修飾方法,該方法顯著提高了修飾DNA分析的產(chǎn)率和效率。該MethylEasy™ DNA亞硫酸氫鹽改性技術(shù)已發(fā)展為這一創(chuàng)新的結(jié)果。

先前的DNA修飾方法
用于確定任何DNA分子的甲基化狀態(tài)的所有先前的基于亞硫酸氫鹽的方法都存在缺點。迄今使用的常規(guī)亞硫酸氫鹽處理導(dǎo)致起始DNA損失84%至96%[3],需要限制性內(nèi)切核酸酶消化,長時間的孵育,將DNA包埋在瓊脂糖中,多管變化和/或多個DNA純化步驟。

MethylEasy ™技術(shù)解決了所有以前的亞硫酸氫鹽療法的缺點,并具有許多優(yōu)點,包括:

  • 快速簡便的使用 - *轉(zhuǎn)化的純化DNA總轉(zhuǎn)換時間為90分鐘
  • 沒有DNA預(yù)處理
  • 幾乎不會丟失DNA
  • 提高靈敏度
  • 放大效率更高
  • 更長的片段生成和
  • 增加模板DNA的穩(wěn)定性(室溫超過一個月)

[1] Frommer,M.,et。Proc.Nat.Acad.Sci.USA,1992,89,1827-1831。
[2] Hayatsu,H.,Wataya,Y.,Kai,K.,&Iida,S.Biochemistry,1970,9,2858-2866 
[3] Grunau,C.,Clark,SJ和Rosenthal,A.Nucleicic Acids Res。2001,29,e65。

 

MethylEasy™研究套件

ME002-1

ME002 - 40個反應(yīng)的滿意度

MethylEasy ™Xceed

MethylEasy ™Xceed是一種快速,超靈敏的亞硫酸氫鹽修飾研究試劑盒,用于檢測基因中的甲基化模式

MethylEasy ™Xceed由初的亞硫酸氫鹽測序方法的開發(fā)(1),以提供DNA轉(zhuǎn)換效率。MethylEasy ™Xceed 的強大功能已經(jīng)在具有甲基化胞嘧啶單堿基分辨率的里程碑式論文中得到證明,如在人類基因組中(2)。

常規(guī)的亞硫酸氫鹽處理導(dǎo)致起始DNA損失84%至96%,需要用限制性核酸內(nèi)切酶消化進行預(yù)處理,將DNA包埋在瓊脂糖中,或多次管變化和沉淀。

MethylEasy ™Xceed解決了所有這些缺點,并且是一種簡單,靈敏和快速的修飾方法,無需DNA預(yù)處理,只需50 pg起始材料。將DNA降解減少90%以上以獲得真正有代表性的甲基化胞嘧啶分析。

 

MethylEasy™ Xceed

MethylEasy ™Xceed是一種快速,超靈敏的亞硫酸氫鹽修飾研究試劑盒,用于檢測基因中的甲基化模式

ME002-1

ME002 - 足夠40次反應(yīng)

  • 易于使用 - 不需要DNA預(yù)處理和簡單的柱純化
  • 敏感性 - 從少至50皮克的DNA開始(約8種哺乳動物細胞當(dāng)量)
  • 快速反應(yīng) - 從野生型到*修飾的DNA總共需要90分鐘的處理時間
  • 優(yōu)異的DNA保存 - 將DNA降解減少90%以上,以獲得真正有代表性的甲基化胞嘧啶分析
  • 更好的轉(zhuǎn)化 - 在測序分析中沒有發(fā)現(xiàn)DNA未轉(zhuǎn)化的證據(jù)
  • 內(nèi)部控制 - 包括反應(yīng)信心和產(chǎn)品支持
  • 每個反應(yīng)的價值很高

英文信息如下:

ProductEasyScreen™ KitMicroorganisms Detected
EB001 & EB001-HTEnteric Bacteria Detection(i) Salmonella spp. 
(ii) Campylobacter spp. 
(iii) Shigella spp. /Enteroinvasive E.coli (EIEC)
(iv) Yersinia enterocolitica. 
(v) toxigenic C. difficile and 
(vi) Listeria monocytogenes
EP001 & EP001-HTEnteric Protozoan Detection(i) Cryptosporidium spp. 
(ii) Giardia intestinalis 
(iii) Dientamoeba fragilis 
(iv) Entamoeba histolytica and 
(v) Blastocystis hominis
EV002 & EV002-HTEnteric Viral Detection(i) Norovirus GI
(ii) Norovirus GII 
(iii) Astrovirus 
(iv) Rotavirus A 
(v) Sapovirus
(vi) Enterovirus
(vii) Bocavirus
(viii) Adenovirus and 
(ix) Adenovirus (40 + 41 only)
CDD001C. difficile DetectionToxigenic C. difficile (targets both tcdA and tcdB)
CDD002C. difficile ReflexHypervirulent C. difficile incl. ribotype 027 & 078 targeting: (i) tcdC gene deletion at position 117, (ii) binary toxin gene (cdtA) and (iii) gyrA gene mutation (fluoroquinolone resistance)

 

 

對于HT(384孔格式)試劑盒,所有試劑盒都足夠用于100RXNs或500RXNs

所有  EasyScreen™  病原體檢測試劑盒都可用于使用EasyScreen™  樣品處理試劑盒準備的  樣品。

有關(guān)EasyScreen™  工作流程以及與核酸提取和實時PCR平臺的兼容性的更多信息,  請訪問我們的  EasyScreen™  工作流程頁面。

 

Enteric Bacterial Targets

Product #Description
ACD001toxigenic C. difficile Primers and Probe
AEB001Salmonella Primers and Probe
AEB002Campylobacter Primers and Probe
AEB003Shigella spp./Enteroinvasive E.coli (EIEC) Primers and Probe
AEB004Yersinia enterocolitica Primers and Probe
AEB005Listeria monocytogenes Primers and Probe

Enteric Protozoan Targets

Product #Description
AEP001Protozoan Universal Primer Set
AEP002Dientamoeba fragilis Probe
AEP003Blastocystis hominis Probe
AEP004Cryptosporidium Probe
AEP005Giardia intestinalis Probe
AEP006Entamoeba histolytica Probe
AEP007Enterocytozoon bieneusi Primers and Probe
AEP008Encephalitozoon intestinalis Primers and Probe

Enteric Viral Targets

Product #Description
AEV001Norovirus GI Primers and Probe
AEV002Norovirus GII Primers and Probe
AEV003Enterovirus Primers and Probe
AEV004Astrovirus Primers and Probe
AEV005Sapovirus Primers and Probe
AEV016Adenovirus Universal Primers and Probe
AEV007Adenovirus 40/41 Primers and Probe
AEV008Bocavirus Primers and Probe
AEV009Rotavirus A Primers and Probe

Other Targets

Product #Description
AEC00116S Primers and Probe

 

上海起發(fā)實驗試劑有限公司是實驗試劑一站式采購服務(wù)商

1:強大的進口輻射能力,血清、抗體、耗材、大部分限制進口品等。

2:產(chǎn)品種類齊全,經(jīng)營超過700多個品牌,基本涵蓋所有生物實驗試劑耗材。

3:提供加急服務(wù),貨品一般1-2周到貨。

4:富有競爭力的價格優(yōu)勢,絕大部分價格有優(yōu)勢。

5:多年積累良好的信譽,大部分客戶提供貨到付款服務(wù)??蛻舭ㄇ迦A、北大、交大、復(fù)旦、中山等100多所高校,ROCHE,阿斯利康、國藥、fisher等藥企。

6:我們還是Santa,Advanced Biotechnologies Inc,Athens Research & Technology,bangs,BBInternational,crystalchem,dianova,FD Neurotechnologies,Inc. FormuMax Scientific,Inc, Genebridege, Glycotope Biotechnology GmbH; iduron,Innovative Research of America, Ludger, neuroprobe,omicronbio, Polysciences,prospecbi, QA-BIO,quickzyme,RESEARCH DIETS,INC,sterlitech;sysy,TriLink BioTechnologies,Inc;worthington-biochem,zyagen等幾十家國外公司授權(quán)代理。

7:我們還是invitrogen,qiagen,MiraiBioam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等*批發(fā),歡迎合作。

 

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