ajinomoto AK03N說(shuō)明書(shū)

IPS / ES細(xì)胞用于臨床研究的無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)基
StemFit _® AK03N

它是
臨床研究的媒介，不含動(dòng)物或人源成分，可以大量增加未分化的iPS / ES細(xì)胞。

該產(chǎn)品由3種溶液組成，并在使用時(shí)混合制備。
在一組中，可以制備約500mL當(dāng)量的培養(yǎng)基。

*已經(jīng)證實(shí)，應(yīng)用了“源自生物來(lái)源的原料標(biāo)準(zhǔn)”的原材料不包括在厚生勞動(dòng)省藥品評(píng)價(jià)機(jī)構(gòu)PMDA的藥事處。

細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)

StemFit _®人iPS細(xì)胞在A(yíng)K03N（201B7股）培養(yǎng)的，相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間周期顯示出穩(wěn)定的高生長(zhǎng)速率。

用各種支架進(jìn)行培養(yǎng)評(píng)估

-511 IMatrix，玻連蛋白-N，基質(zhì)膠_® 6孔板涂覆的人iPS細(xì)胞（201B7株）StemFit _®它被證實(shí)是可能的培養(yǎng)與AK03N。此外，證實(shí)未分化的標(biāo)志物OCT 3/4（紅色）和TRA-1 - 60（綠色）在每個(gè)支架中是陽(yáng)性的。

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克隆iPS細(xì)胞

StemFit _®中通過(guò)使用的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的iPS細(xì)胞，可以是基因組編輯，以及克隆。

參考書(shū)目

1）Shin-Il Kim等人Methods Mol Biol.2016 1357：111-31。

2）Naoki Ichiyanagi等人，Stem Cell Reports。2016年4月12日; 6（4）：496-510。

確認(rèn)分化能力為三個(gè)胚層

StemFit _® IPS細(xì)胞培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基外胚層，中胚層分化成內(nèi)胚層已被證實(shí)。

分化為胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞

StemFit _®使用AK03N介質(zhì)和iMatrix-511，使用上述方案在75000細(xì)胞/ cm 2，在培養(yǎng)23天接種后保持1231A3應(yīng)變iPS細(xì)胞。

• 到A）胰祖細(xì)胞培養(yǎng)13天后（PP）和23個(gè)的胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞（EC），評(píng)估OCT-4，PDX-1，INS在qPCR中表達(dá)（N = 3）。基因表達(dá)是相對(duì)值，人胰島中的表達(dá)水平為1。
• B）使用免疫染色評(píng)估胰島素表達(dá)。

參考文獻(xiàn)：Shahjalal HM等，Al J Mol Cell Biol。2014年10月; 6（5）：394-408

分化為心肌細(xì)胞

StemFit _®使用AK03N介質(zhì)和iMatrix-511，保持201B7應(yīng)變iPS細(xì)胞播種后板，使用上述方案制備的心肌細(xì)胞。21天后進(jìn)行各種評(píng)價(jià)。

• A）使用FACS的cTNT陽(yáng)性細(xì)胞比率測(cè)量結(jié)果。
• B）使用免疫染色的α-輔肌動(dòng)蛋白表達(dá)的圖像。比例尺：100μm。
• C）使用MED-64測(cè)量細(xì)胞外電位的結(jié)果。在第21天將細(xì)胞粘附到涂有纖連蛋白的電極上并測(cè)量細(xì)胞外電位信號(hào)，Interspike間隔，場(chǎng)電位持續(xù)時(shí)間（FPD）。

*此數(shù)據(jù)由iPS Portal Co.，Ltd。收購(gòu)和分析。
參考文獻(xiàn)：Miki等，Cell Stem Cell，16,699,2015

分化為神經(jīng)細(xì)胞

StemFit _®使用AK03N介質(zhì)和iMatrix-511，以5,000個(gè)細(xì)胞/厘米2，誘導(dǎo)分化成使用癥狀的方法的雙重抑制SMAD神經(jīng)干細(xì)胞接種后保持201B7應(yīng)變iPS細(xì)胞。神經(jīng)干細(xì)胞在不包括bFGF的條件下培養(yǎng)17天，并誘導(dǎo)至神經(jīng)元。

• A）通過(guò)qPCR評(píng)估SYNAPSIN，NEUROD1表達(dá)。
• B）通過(guò)免疫染色證實(shí)MAP2的表達(dá)。比例尺= 
  200μmPO：聚鳥(niǎo)氨酸，P：通過(guò)。n = 3

與其他公司進(jìn)行細(xì)胞和基因治療進(jìn)行彈射器培養(yǎng)試驗(yàn)

細(xì)胞與基因治療彈射器是促進(jìn)英國(guó)細(xì)胞治療和基因治療領(lǐng)域的商業(yè)化的研究，建立了以推進(jìn)企業(yè)在同一領(lǐng)域，它是獨(dú)立的的研究機(jī)構(gòu)。為了實(shí)現(xiàn)使用iPS細(xì)胞的再生醫(yī)學(xué)，我們正致力于開(kāi)發(fā)具有成本效益的細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)。在該研究中，通過(guò)將iPS細(xì)胞與其他公司的不同組成的培養(yǎng)基進(jìn)行比較來(lái)進(jìn)行宜培養(yǎng)基的選擇。其結(jié)果是，“StemFit _®iPS細(xì)胞培養(yǎng)” AK03N，除了高細(xì)胞生長(zhǎng)性能，基因表達(dá)的均勻性，使得不存在染色體異常，并且通過(guò)使用第三-4產(chǎn)物培養(yǎng)iPS細(xì)胞比較顯示出優(yōu)異的特性