neb P0704S說明書

PNGase F.

目錄 ＃

 P0704S

• 濃度

   500,000單位/毫升

  尺寸

•   P0704L  75,000個單位

  價(jià)格表

  $ 718.00

PNGase F是從糖蛋白中去除幾乎所有N-連接的寡糖的有效的酶促方法。PNGase F是酰胺酶，其在高甘露糖，雜合和復(fù)合寡糖的內(nèi)部GlcNAc和天冬酰胺殘基之間切割。

• 通過SDS-PAGE和完整的ESI-MS測定，純度≥95％
• 非重組，沒有可檢測的內(nèi)切糖苷酶F1，F(xiàn)2或F3污染
• 儲存在50％甘油中; 宜活動和穩(wěn)定性長達(dá)24個月
• 可在天然或變性條件下使用
• 優(yōu)化糖蛋白的去糖基化; 使N-聚糖核心寡糖保持完整，適合進(jìn)一步分析

肽 - N-糖苷酶F，也稱為PNGase F，是一種酰胺酶，可裂解來自N-連接糖蛋白的高甘露糖，雜合寡糖和復(fù)合寡糖的內(nèi)層GlcNAc和天冬酰胺殘基（1）

詳細(xì)的特異性： 

當(dāng)內(nèi)部的GlcNAc殘基與α1-3巖藻糖殘基連接時(shí)，PNGase F不能從糖蛋白切割N-連接的聚糖。這種修飾常見于植物和一些昆蟲糖蛋白中。

產(chǎn)品來源

PNGase F從腦膜炎黃桿菌（Flavobacterium meningosepticum）（3）中純化，不含蛋白酶和Endo F活性。

提供的試劑

本產(chǎn)品隨附以下試劑：

應(yīng)用功能

• 糖蛋白分析
• 從糖蛋白中去除高甘露糖，雜合和復(fù)雜的  N-聚糖
• 無污染物（Endo F，蛋白酶等）

單位定義

一個單位定義為在37℃下在10μl的總反應(yīng)體積中在1小時(shí)內(nèi)從10μg變性的RNase B中除去> 95％的碳水化合物所需的酶量。

單位定義測定：
將10μgRNaseB用1X糖蛋白變性緩沖液（0.5％SDS，40mM DTT）在100℃變性10分鐘。加入NP-40和GlycoBuffer 2后，加入兩倍稀釋的PNGase F，將反應(yīng)混合物在37℃下溫育1小時(shí)。通過SDS-PAGE顯現(xiàn)反應(yīng)產(chǎn)物的分離。

1X糖蛋白變性緩沖液
0.5％SDS 
40 mM DTT 

1X NP-40
1％NP-40，MilliQ-H ₂ O

反應(yīng)條件

1X GlycoBuffer 2 
在37°C孵育

1X GlycoBuffer 2 
50 mM磷酸鈉
（pH值@ 25°C）

貯存溫度

-20℃下

儲藏條件

在 25℃下，20mM Tris-HCl 
50mM NaCl 
5mM EDTA 
50％甘油
pH 7.5

熱滅活

75°C，10分鐘

分子量

表觀：36000道爾頓

1. 由于SDS抑制PNGase F活性，因此必須使NP-40存在于反應(yīng)混合物中。為什么這種非離子型去污劑抵消SDS抑制作用目前尚不清楚。
2. 為了使天然糖蛋白去糖基化，可能需要更長的孵育時(shí)間以及更多的酶。
3. PNGase F不會切割  含有核心α1-3巖藻糖的N-連接聚糖。
4. 典型反應(yīng)條件：請參閱協(xié)議