Celltechgen CTG-MGN4766說明書

Screening Kit

• Model: CTG-MGN4766

細節(jié)：

- 篩選套件

貨號：CTG-MGN4766

試劑盒組分：

2毫升 - 磁珠與單克隆抗體結(jié)合 - 。

200μl-單克隆抗體，R-PE共軛（用于檢測）

描述

該試劑盒用于使用磁珠磁性標記來消耗 - ⁺細胞。細胞用 - 磁珠標記并施加到磁柱上，收集流過部分中的耗盡細胞用于進一步實驗。篩選步驟可在細胞擴增后再次進行。

目標特征

符號： -

基因編號：729816

Uniprot條目：Q04683

蛋白質(zhì)名稱：CXC趨化因子受體5型（CXC-R5）（CXCR-5）（伯基特淋巴瘤受體1同源物）（CD抗原CD185）Mus musculus（Mouse）

目標功能

容量        

1 X 10 ^9個細胞

公式  

所有組分均以含有穩(wěn)定劑和0.05％sodium azide的緩沖液供應(yīng)。

存儲和使用      

在2-8°C的溫度下避光保存。不要凍結(jié)。到期日期顯示在樣品瓶標簽上。該產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于診斷程序。

一般議定書

提供篩選珠粒以用突變的細胞表面抗原分離靶細胞或用特異性抗原消耗非靶細胞。篩選程序通過用針對細胞表面抗原的單克隆抗體磁珠間接磁性標記細胞（突變或特異于非靶細胞）進行，然后通過柱分離標記的細胞和靶細胞。收集流出部分以進行進一步分析。

1.樣品制備

• 當(dāng)使用抗凝外周血或血沉棕黃層時，應(yīng)通過密度梯度離心分離外周血單核細胞（PBMC）。
• 為了在密度梯度分離后除去血小板，將細胞沉淀重懸于緩沖液中，并在20℃下以200×g離心10-15分鐘。小心吸出上清液。重復(fù)洗滌步驟。
• 使用組織或裂解的血液時，使用標準方法制備單細胞懸液。
• 死細胞可以非特異性結(jié)合磁珠。為了去除死細胞，我們建議使用密度梯度離心或死細胞去除試劑盒。
• 保持細胞冷卻，并使用預(yù)先冷卻的溶液。

2.磁性標簽

• 以下給出的磁性標簽卷多可達10個？總細胞。工作時少于10？細胞，使用與指示相同的體積。使用較高的細胞數(shù)時，相應(yīng)地擴大所有試劑體積和總體積。
• 應(yīng)滴定初級染料綴合的抗體以確定宜染色稀釋度。染色不應(yīng)該增加陰性群體的熒光強度。

1）     計算細胞數(shù)量。

2）     以300×g離心細胞懸浮液10分鐘。*吸出上清液。

3）     每10 ^7個總細胞將細胞重懸于80μL緩沖液中。注意：等分適量的細胞用于抗體-R-PE標記和檢測。

4）     每10小時加入20μL抗細胞表面抗原磁珠?？偧毎?。

5）充分混合，在2-8℃下孵育15分鐘。

6）每10小時加入1-2 mL緩沖液洗滌細胞？將細胞以300×g離心10分鐘。

7）*吸出上清液。

8）重新懸掛10？細胞在500μL緩沖液中。注意：對于更高的單元格數(shù)，請相應(yīng)地擴大緩沖區(qū)容量。

9）繼續(xù)磁分離。

3.篩選靶細胞

1）    將色譜柱放在合適的分離器的磁場中。

2）    用2 mL緩沖液沖洗制備色譜柱。

3）    將細胞懸浮液施加到柱上。

4）    收集未標記的細胞，其通過并用2×1mL緩沖液洗滌柱。一旦柱貯存器為空，則通過連續(xù)添加緩沖液來執(zhí)行洗滌步驟。收集總排出物。其含有未標記的預(yù)富集漿細胞部分。

5）    通過以300×g離心10分鐘收集流出級分中的靶細胞，小心吸出上清液。

6）    將未接觸的細胞重懸于培養(yǎng)基或所需的緩沖液中用于進一步實驗。

7）    等分適當(dāng)量的細胞用于抗體-R-PE標記和檢測是否有足夠的細胞，否則，在細胞擴增后進行抗體-R-PE標記和檢測。

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